Kolorimetrinen määritys
Kolorimetrinen määritys on mahdollinen tyyppi määrityksessä , kun kemiallinen reaktio antaa värillisiä tuotteita ja jos intensiteetti väritys on verrannollinen pitoisuuteen elementtiin määritetään. Kolorimetriset määritykset perustuvat Beer-Lambert-lakiin .
Kolorimetrinen määritys on myös mahdollista käyttämällä värillisiä indikaattoreita , kuten helianthine, phenolphthalein, bromocresol green, jotka värjätään esimerkiksi erilaisissa pH-arvoissa ja jotka sen vuoksi pystyvät osoittamaan, kun vastaavuuspiste on saavutettu . Tätä kutsutaan myös kolorimetriseksi titraukseksi .
Olut-Lambertin laki
Käytetty muoto on seuraava:
- A: liuoksen absorbanssi ilman yksikköä
- ε: molaarinen ekstinktiokerroin L × mol -1 × cm -1 (joskus merkitty with: llä)
- l: säiliön pituus, jonka valo ylittää, cm
- C: moolipitoisuus moolina × L -1 .
Absorbanssi mittaus on antama spektrofotometrillä , joka mittaa optisen tiheyden . Mitä värillisempi liuos on, sitä vaikeampi valon on kulkea läpi, ja siksi enemmän liuoksen absorbanssi kasvaa.
Toteutuksen yleiset ehdot
Kolorimetrisen määrityksen suorittamiseksi tiettyjen ehtojen on täytyttävä:
- reaktion tulisi antaa väkevyys tai opasiteetti, joka on verrannollinen konsentraatioon;
- värin tai peittävyyden on oltava vakaa mittausten aikana;
- analysoitavan yhdisteen on oltava hyvin alhainen (muuten laimea);
- kalibrointialue on suoritettava samoissa fysikaalis-kemiallisissa olosuhteissa kuin testit;
- spektrofotometrin aallonpituuden on oltava se, joka sallii suurimman mahdollisen absorbanssin.
Jos nämä ensimmäiset ehdot täyttyvät, kolorimetrinen määritys voi olla mahdollista.
Kalibrointialueen toteutus
Spektrofotometrin säätämiseksi on välttämätöntä suorittaa kalibrointialue (mukaan lukien tietyt markkinoilla myytävät sarjat). Tämä alue mahdollistaa absorbanssin määrittämisen tietyllä aallonpituudella tietylle putkelle tai tietyn pituiselle spektrofotometrisolulle halutun yhdisteen pitoisuudelle. Siksi on välttämätöntä valmistaa liuos määriteltävästä alkuainepitoisuudesta. Kalibrointialueen ja määrityksen saavuttamiseksi lopullisen nestemäärän on oltava jokaisessa putkessa sama . Reagenssien määrien on kuitenkin pysyttävä vakioina reaktion mahdollistamiseksi, ja määritettävien yhdisteiden määrien (suhteessa konsentraatioihin) on vaihdeltava kussakin putkessa. Joissakin annostusmenetelmissä se valmistetaan tislatulla vedellä samaan tilavuuteen (esimerkiksi 100 ml ) säätämällä taso mittarimerkkiin .
0 tai tyhjä putki on ehdottomasti tehtävä poistamaan itse reagensseista johtuva absorbanssi. Tämä putki ei sisällä analysoitavaa yhdistenäytettä.
Kalibrointialueen tuottaminen vaatii suurta tarkkuutta ( mittapullojen , pipettien jne. Käyttö ), ja se tulisi mieluiten suorittaa samoissa olosuhteissa kuin testit ja saman käyttäjän toimesta .
Kolorimetrisen taulukon luominen
Kolorimetrisen taulukon luominen mahdollistaa virheiden välttämisen protokollia suoritettaessa ja tuloksia tallennettaessa. Tässä on esimerkki DNS: n suorittamasta glukoosimäärityksen kolorimetrisestä taulukosta .
| Putken numero | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | x1 | x2 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 0,01 mol / l glukoosistandardiliuos ml: na | 0 | 0,3 | 0.6 | 0,9 | 1.2 | 1.5 | 0 | 0 |
| Testiannos millilitroina | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0.5 | 1.0 |
| Tislattua vettä millilitroina | 18.0 | 17.7 | 17.4 | 17.1 | 16.8 | 16.5 | 17.5 | 17.0 |
| DNS (reaktiivinen) millilitroina | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 |
| Absorbanssi aallonpituudella 350 nm tietylle putkelle / kyvetille | 0 | 0,205 | 0,494 | 0,748 | 1.022 | 1,280 | 0,668 | 1,340 |
| Glukoosin määrä µmolissa | 0 | 3.0 | 6.0 | 9.0 | 12.0 | 15.0 | 7.9 | kantaman ulkopuolella |
Tulosten lukeminen
Saatuaan kalibrointialueen absorbanssiarvot absorptiokäyrä piirretään yhdisteen määrien (tai useimmiten pitoisuuksien) funktiona. Suoran viivan on kuljettava vertailumerkin aloituskohdan läpi ja oltava lähellä kutakin kalibrointipistettä, jos alue on suoritettu oikein ( korrelaatiokerroin on yli 99,95%, esimerkiksi).
Testin absorbanssiarvo (alkuperäinen liuos valinnaisesti mikrosuodatettiin) piirretään tälle riville läsnä olevan yhdisteen määrän määrittämiseksi. Palataksemme alkuvaiheessa olevan analysoitavan yhdisteen konsentraatioon otetaan huomioon testinäytteen tilavuus ja mahdollinen laimennus.
Katso myös
- Glukoosin määrittäminen DNS: n avulla
- Fosforin määrittäminen Briggs-menetelmällä (kolorimetrinen)
- Proteiinien määrittäminen Biuret-reagenssilla (kolorimetrinen)
- Proteiinin määritys bikinkonihappo (BCA) -menetelmällä (kolorimetrinen)
- Nessler-putki