Klenow-fragmentti on suurempi 2-proteiinin fragmentit on muodostettu hydrolysoimalla Escherichia coli DNA-polymeraasi- I proteaasin (subtilisiini).
Vuonna 1970 löydetty se säilyttää kaksi DNA-polymeraasi I: n katalyyttistä aktiivisuutta: 5 '→ 3' polymeraasin ja 3 '→ 5' eksonukleaasin , mutta on menettänyt 5 '→ 3' eksonukleaasiaktiivisuutensa vasta syntetisoitujen hajoamisesta. DNA. Siksi sitä suositaan usein koko entsyymin sijaan.
Toinen fragmentti, joka muodostui E. coli DNA-polymeraasi I: n pilkkomisen aikana, säilyttää 5 '→ 3' eksonukleaasiaktiivisuuden, mutta on menettänyt kaksi Klenow-fragmentin pitämää aktiivisuutta.
Reaktio on sama kuin DNA-polymeraasi I: n väliaineen olosuhteet ja reaktionopeus ovat samat.
Klenow-fragmenttia käytetään:
Koska E. coli -polymeraasi I: n 5 '→ 3' -eksonukleaasiaktiivisuus tekee monista manipulaatioista mahdottomia, Klenow-fragmentin on todettu olevan erittäin hyödyllinen tutkimuksessa.
Tätä fragmenttia käytetään DNA-replikaation aikana komplementaarisen juosteen syntetisoimiseksi yksisäikeisestä DNA: sta ja alukkeesta. PCR: n alkupäässä oleva osa (polymeraasiketjureaktioprosessi, ranskaksi polymeraasiketjureaktio ) korvataan nyt lämpöstabiililla entsyymeillä, kuten Taq-polymeraasi .
http://www.chups.jussieu.fr/polys/biochimie/BGbioch/POLY.Chp.2.6.html