MNase-sekv

MNaasi-sekvenssi on tekniikka, jota käytetään molekyylibiologian alueiden tunnistamiseksi, että kromatiinin käytössä nukleosomeja koko genomin .

Kuvaus

Tämä tekniikka perustuu MNaasilla pilkkomiseen johtaneiden fragmenttien suurella läpäisykyvyllä sekvensointiin . Kromatiinin pilkkominen MNaasilla on itsessään suhteellisen yksinkertainen ja tehokas menetelmä, joka tekee mahdolliseksi tunnistaa yhden tai useamman nukleosomin käyttämät DNA- alueet . Kun permeabiloituneiden solujen ytimet altistetaan MNaasille, kaksiarvoisen kationin (esimerkiksi Ca2 + ) läsnä ollessa tämä nukleaasi tekee kaksijuosteisia leikkauksia nukleosomien välillä, kuten vastakkaisessa kuvassa on esitetty. Kromatiinisubstraattien käsittely erittäin korkeilla MNaasipitoisuuksilla tuottaa suurimman osan mononukleosomeista. Siirtyminen geelillä, jota seuraa leikkaus noin 146 emäsparin (bp) ympäri, mahdollistaa sen, että saadaan suuri enemmistö mononukleosomeista. Tämän prosessin tuloksena olevat fragmentit sekvensoidaan sitten erilaisten suuritehoisten sekvensointiprotokollien mukaisesti.

MNase-Seq-tietojenkäsittely

MNase-Seq-datan perusprosessointi on samanlainen kuin ChIP-Seq , DNase-Seq ja FAIRE-Seq , paitsi että fragmentit venytetään yleensä tarkalleen 146 bp: ksi fragmenttien todellisen koon heijastamiseksi. Muut menetelmät, jotka perustuvat lukea muutos 73 bp: n avulla voidaan myös päätellä nukleosomaalisten keskipiste, tai päät nukleosomien mukaan eivät suorita mitään venymä kunkin säikeen ja käyttämällä alkaa koordinoida kunkin lukea (suunnattu mukaan säie).

Aiheeseen liittyvät artikkelit

Huomautuksia ja viitteitä

  1. (in) RJ Clark ja G. Felsenfeld , "  Structure of Chromatin  " , Nature New Biology , voi.  229,27. tammikuuta 1971, s.  101–106 ( DOI  10.1038 / newbio229101a0 , luettu verkossa , käytetty 7. helmikuuta 2016 )
  2. R. Axel , "  DNA: n pilkkominen ytimissä ja kromatiinissa stafylokokki-nukleaasilla  ", Biochemistry , voi.  14,1. st heinäkuu 1975, s.  2921–2925 ( ISSN  0006-2960 , PMID  1148185 , luettu verkossa , käytetty 7. helmikuuta 2016 )
  3. Yong Zhang , Zarmik Moqtaderi , Barbara P. Rattner ja Ghia Euskirchen , "  Luontaiset histoni-DNA-vuorovaikutukset eivät ole tärkein determinantti nukleosomiasemille in vivo  ", Nature Structural & Molecular Biology , voi.  16,1. st elokuu 2009, s.  847–852 ( ISSN  1545-9985 , PMID  19620965 , PMCID  2823114 , DOI  10.1038 / nsmb.1636 , luettu verkossa , käytetty 7. helmikuuta 2016 )
  4. Romain Fenouil , Pierre Cauchy , Frederic Koch ja Nicolas Descostes , "  CpG-saaret ja GC-pitoisuus sanelevat nukleosomien ehtymisen transkriptiosta riippumattomalla tavalla nisäkkäiden promoottoreissa  ", Genome Research , voi.  22,1. st joulukuu 2012, s.  2399–2408 ( ISSN  1549-5469 , PMID  23100115 , PMCID  3514669 , DOI  10.1101 / gr.138776.112 , luettu verkossa , käytetty 7. helmikuuta 2016 )