In biokemia , sekvensointi koostuu määritettäessä lineaarinen järjestys komponentteja makromolekyylin (jäljempänä aminohapot on proteiini , nukleotidit on nukleiinihappo , kuten DNA: n , monosakkaridit on polysakkaridi , jne.).
In genetiikka , sekvensointi koskee määrittämiseksi sekvenssin ja geenien tai jopa kromosomeja , tai jopa, että täydellinen genomin , joka teknisesti merkitsee suorittamiseksi sekvensointi DNA: n, joista nämä geenit tai näiden kromosomeja.
DNA- sekvensointi koostuu tietyn DNA-fragmentin nukleotidien sekvenssisekvenssin määrittämisestä. Suurin osa DNA-sekvensoinnista on tehty Sanger- menetelmällä . Tässä tekniikassa käytetään DNA: n polymerointireaktiota täysin keinotekoisesti syntetisoidun entsyymin (aiemmin Klenow-fragmentti ) "sekvenaasin" ja dideoksiribonukleotidien (ddNTP) kanssa. Uudet tekniikat, kuten pyrosekvensointi, ovat kuitenkin ottaneet kasvavan osuuden sekvensointimarkkinoilla. Pyrosekvensointia käytetään nyt enemmän genomin tietojen tuottamiseen kuin Sanger-sekvensointi, koska se mahdollistaa genomin nopean sekvensoinnin.
Sekvenssi on DNA sisältää tarvittavat tiedot elollisen hengissä ja lisääntyä. Tämän sekvenssin määrittäminen on siksi hyödyllistä sekä tutkimuksissa, joiden tarkoituksena on tietää, miten organismit elävät, että sovellettaville kohteille. Lääketieteessä sitä voidaan käyttää geneettisten sairauksien tunnistamiseen, diagnosointiin ja mahdollisesti hoitojen löytämiseen. Biotekniikka on kukoistava kuria mahdollisuuksia monille hyödyllisiä tuotteita ja palveluita.
Pyrosekvensointi on menetelmä, joka perustuu pyrofosfaatti julkaisu tunnistus, joka tapahtuu aikana sisällyttäminen nukleotidia. DNA-juoste on ensin monistettava PCR: llä ennen sekvensointia. Järjestys, jossa nukleotidit lisätään, valitaan sitten sekvensseri (ts. GATC). Aina kun ketjussa lisätään spesifinen nukleotidi DNA-polymeraasin avulla, pyrofosfaatti vapautuu ja muutetaan ATP: ksi ATP-sulfurylaasilla. ATP stimuloi sitten lusiferiinin hapettumista lusiferaasiksi, tämä reaktio tuottaa valosignaalin, joka tallennetaan piikin muodossa. Kunkin nukleotidin liittyminen korreloi sitten signaalin kanssa. Valosignaali on verrannollinen DNA-juosteen synteesin aikana sisällytettyjen nukleotidien määrään (kaksi liitettyä nukleotidia vastaavat kahta piikkiä). Kun lisättyjä nukleotideja ei ole sisällytetty DNA-molekyyliin, signaalia ei tallenneta. Tämä tekniikka ei vaadi fluoresoivasti leimattuja nukleotideja tai geelielektroforeesia.
Vaikka oligosakkaridit ja polysakkaridit ovat myös biopolymeerejä , ei ole niin yleistä puhua polysakkaridin "sekvensoinnista" useista syistä. Vaikka monet polysakkaridit ovat lineaarisia, monilla on seurauksia. Monia eri yksiköitä ( yksittäisiä monosakkarideja ) voidaan käyttää ja yhdistää eri tavoin. Menetelmiin oligosakkaridien ja polysakkaridien rakenteen määrittämiseksi kuuluvat NMR-spektroskopia ja metylaatioanalyysi.