Mikrotumatesti

Mikrotumia testi (tai mikrotuma määrä testi ) on laajalti käytetty ekotoksikologisten tai biomonitorointiin testi , joka perustuu havaitsemiseen ja laskenta mikrotumia altistuneissa soluissa (tavallisesti in vitro ), joka genotoksinen tai epäillään olevan tällainen. Muistutuksena on, että mikrotuma on elävässä solussa , "väärässä ytimessä", joka muodostuu epänormaalisti solujen jakautumisen aikana . Jos se ei ole aiheuttanut solukuolemaa ( apoptoosin kautta ), se jatkuu koko solun eliniän ja liittyy yleensä mutageeniseen vaikutukseenja joskus syöpää aiheuttavia . Mikrotumien läsnäolo osoittaa, että solu on altistettu yhdelle tai useammalle genotoksiselle ja klastogeeniselle aineelle ( eli vastuussa DNA-molekyylin kaksoisjuosteessa esiintyvistä katkoksista ) tai "aneugeeniselle" aineelle (ts. Muuttamalla mitoottista laitetta, joka mahdollistaa solujen jakautumisen).

Mikrotumakoe on yksi kromosomipoikkeavuustestin muunnelmista . Sen avulla voidaan erityisesti arvioida äskettäistä altistusta (tuntia, päivää).

Sovellukset

Sen tarkoituksena on arvioida yhdisteen genotoksinen potentiaali tai osoittaa altistuminen mutageeniselle aineelle. Sillä ja sillä on monia erityisiä käyttötarkoituksia:

terveysympäristö , biomonitorointi ( esim . ekotoksikologiassa sitä käytetään ilman, pinta- tai juomaveden, maaperän pilaantumisen tai kasvien, eläinten, sienien tai mikro-organismien altistumisen perimää aiheuttaville epäpuhtauksille, esimerkiksi teollisuuden päästöistä, vaarallisista jätteistä, veden desinfiointiaineet jne. )
työterveyden , seurata mahdollisesti perimää vaurioittavia aineita. Sillä on ennustearvo syöpäriskille esimerkiksi formaldehydin kanssa tai työskentelemällä patologialaboratoriossa . ;
Genotoksisten kemikaalien arviointi ( in vivo ja in vitro ) esimerkiksi ennen luvan markkinoida molekyyliä (lääke, torjunta-aine jne.)
Antigeenitoksisten tuotteiden tutkimus tai arviointi
DNA-vauriotutkimus (yksijuosteinen rikkoutuminen; alkalilabiilit kohdat; DNA: n silloitus); tutkimus DNA: n korjaamisesta tai apoptoosista.

Sitä voidaan käyttää kaikenlaisten kohdesolujen (virtsarakon solut, intraoraali- solut, fibroblastit , keratinosyytit , jne ) sisältäen kasvien soluihin.

Sitä käytetään erityisesti T-lymfosyytteihin viljelmässä (mallisolut); voimme sitten laskea binukleaarisissa T-lymfosyytteissä näkyvien mikrotumien lukumäärän, jotka on saatu estämällä sytoplasman jakautuminen sytokalasiini B: llä täydellisen ydinjakautumisen jälkeen, etuna on, että lasketaan vain perinnölliset genotoksiset vauriot (mikrotumat ainoissa binukleaarisissa lymfosyyteissä), vain vauriot tiukasti geneettisen mutaation määritelmän .

Sitä voidaan soveltaa myös näytteeseen soluista, jotka on altistettu in vivo (esim . Koe-eläinten lymfosyytit tai ihmiset, jotka ovat mahdollisesti alttiina tuotteen genotoksiselle aineelle ).

Hyödyllinen lisäys

Testiä voidaan hyödyllisesti täydentää tutkimuksella mikrotumaan suljetun "geneettisen materiaalin" tyypistä ja laadusta (onko sentromereja ?, Minkä tyyppisiä kromosomeja siellä muutetaan? Millaisten kromosomien muutoksilla?).

Tämän mahdollistaa fluoresoiva in situ -hybridisaatiotekniikka (FISH-tekniikka). Voimme siis ymmärtää paremmin työskentelymekanismit: esimerkiksi sentromereiden läsnäolon mikrotumissa pitäisi ehdottaa aneugeenista vaikutusta, kun taas niiden poissaolo osoittaa enemmän kohti klastogeenista vaikutusta ).

Edut / haitat, rajoitukset

Edut

Testi on helppo suorittaa, havaitsee sekä klastogeeniset että aneugeeniset vaikutukset ja on nopea tulkita; ja solukohtainen analyysi antaa mahdollisuuden saada suuri määrä hyödyllisiä tietoja tulosten hyvään tilastolliseen käsittelyyn.

Haitat, rajoitukset

Tämä testi ei havaitse kaikkia kromosomipoikkeamia.

Se vaatii solunäytteenoton (⇒ invasiivisuus, stressitekijä).

On sekoittavia tekijöitä (kuten kaikissa tämän tyyppisissä testeissä). Huomioon otettavia ovat ikä, tupakka ja entsyymien ilmentymisen polymorfismi.

2000-luvun alussa mekanismi, joka selitti, miksi nämä tekijät olivat hämmentäviä (erityisesti tupakan osalta), oli kuitenkin edelleen huonosti ymmärretty ja kiistanalainen.

Kuten kaikki tämäntyyppiset testit, se ei mahdollista määritellä seoksessa, mikä mutageeninen aine on; näin nähtyään imukudoksen kasvainten esiintymisen kahdella työntekijällä, jotka vuosien ajan käsittelivät Välimeren haiden maksasta peräisin olevia öljyjä (ja näistä öljyistä uutettua skvaleenia ), havaittuaan, että skvaleenin levittäminen laboratorion hiirten iholle aiheutti myös tämän tyyppisen kasvaimen tai leukemia , käytimme mikrotumakokeessa ja raaka öljyt uutetaan maksa kolmen lajin Välimeren haiden (mukaan lukien yksi elävä pinnalla, Prionace glauca ja kaksi asuu suuri varojen Centrophorus granulosus ja Galeus melastomus . tulokset vahvistivat, että "Kolmen haalajin raaka maksaöljyt ovat genotoksisia ja vahvistavat, että karsinogeenisuuden riski on suuri . " Pelkästään testi ei selvitä, onko mutageeninen aine vain skvaleenia (käytetään laajalti lääke- ja kosmetiikkateollisuudessa , koska se on erityisen stabiili hyvin korkeissa lämpötiloissa) tai jos muita ageeneja mukana ovat myös rasvaliukoiset ts (monet meren epäpuhtaudet ovat).

Standardit ...

Mikrotumakokeessa on aiheena suuntaviivat OECD testaukseen kemikaalien kuitenkin soveltaa vain punasolujen ja nisäkkäiden (linja 474).

Huomautuksia ja viitteitä

Bonassi S, Znaor A, Ceppi M, Lando C, Chang WP, Holland N, Kirsch-Volders M, Zeiger E, Ban S, Barale R, Bigatti MP, Bolognesi C, Cebulska-Wasilewska A, Fabianova E, Fucic A, Hagmar L, Joksic G, Martelli A, Migliore L, Mirkova E, Scarfi MR, Zijno A, Norppa H ja Fenech M (2007) Perifeerisen veren lymfosyyttien lisääntynyt mikrotumataajuus ennustaa syöpäriskin ihmisillä. Karsinogeneesi 28: 625-631.
O. FARDEL, L. VERNHET, V. NOUVEL, A.-V. JUNG & A. LEGRAND-LORANS (2009), RECORD-raportti; Käyttö genotoksisuuskokeiden seurantaan työntekijän altistumisen jätteen käsittely ja kierrätys teollisuuden , 163 s., N o 07-0667 / 1A.
Gauthier, L. (1989). Tutkiminen juotavan tai hoidettavan pintaveden genotoksisesta voimasta muodostamalla mikrotumia Pleurodeles-valssiin. Väitöskirja, Toulouse 3; ( yhteenveto ).
L. Gauthier ja Y. Lévi , " Triton micronucleus -testin soveltaminen veden desinfiointiprosessien genotoksisuuden suoraan tutkimiseen " , Journal français d'hydrologie ,1990( ISSN 0335-9581 , DOI 10.1051 / vesi / 19902101147 , kuultu 29. syyskuuta 2020 ) ,s. 147–157
Narod SA, Neri L, Risch HA ja Raman S (1988) Lymfosyyttien mikrotumat ja sisarkromatidivaihdot Kanadan liittovaltion laboratorion työntekijöiden välillä. Am J Ind Med 14: 449-456.
Sari-Minodier, I., Orsiere, T., Auquier, P., Pompili, J., & Gelin, C. (2001). Mikrotumatesti mutageeniriskin arvioinnissa: Tutkimus 10 työntekijältä, jotka altistuvat formaldehydille. Ammattitautien ja ammattilääketieteen arkisto, 62 (2), 75-82.
Brahem, A., Bouraoui, S., ElGhazel, H., Amor, AB, Saad, A., Dabbebi, F., & Mrizek, N. (2011). Genotoksisen riskin arviointi anatomopatologialaboratoriossa mikrotumakokeella. Ammattitautien ja ympäristön arkisto, 72 (4), 370-375.
Danièle Valadaud-Barrieu , ” mikrotumien induktiotesti” Allium sativumilla; klastogeenisten ja mitoklastisten aineiden erilaistuminen ” , mutaatiotutkimuskirjeissä ,1. st tammikuu 1983( ISSN 0165-7992 , DOI 10.1016 / 0165-7992 (83) 90037-4 , kuultu 29. syyskuuta 2020 ) ,s. 55–58
Florence Duffaud , Thierry Orsière , Laurence Digue ja Roger Favre , " Binukleaaristen T-lymfosyyttien mikrotumatestin kiinnostus kulttuuriin genotoksisen tapahtuman havaitsemiseksi syöpäpotilailla ", Bulletin du Cancer , voi. 85, n ° 3,23. maaliskuuta 1998( ISSN 0007-4551 , luettu verkossa , kuultu 29. syyskuuta 2020 )
Mateuca R, Lombaert N, Aka PV, Decordier I ja Kirsch-Volders M (2006) Kromosomimuutokset: induktio, havaitsemismenetelmät ja sovellettavuus ihmisen biomonitoroinnissa. Biochemistry 88: 1515-1531
Lewinska D, Palus J, Stepnik M, Dziubaltowska E, Beck J, Rydzynski K, Natarajan AT ja Nilsson R (2007) Kuparisulattoalan työntekijöiden perifeerisen veren lymfosyyttien ja bukkaalisten limakalvosolujen mikrotumien taajuus, erityisesti arseenialtistus. Int Arch Occup Environ Health 80: 371-380.
Iarmarcovai G, Bonassi S, Botta A, Baan RA ja Orsiere T (2007) Geneettiset polymorfismit ja mikrotumien muodostuminen: Katsaus kirjallisuuteen. Mutat Res.
Nersesyan AK (2006) indusoiko tupakointi tupakointia bukkaalisissa soluissa? Am J Clin Nutr 84: 946 - 947; kirjoittajan vastaus 947-948
Kroning F.Uber die induktion von leukamien bei C57 R1 mausen nach pinselung einer dorsalen hautpartie mit kurzkettigen fettsauren, fettsaureestern und mit squalen. Acta Unio Internra Contra Cancrum 1959; 15: 619-26.
Bartfai, E., Orsière, T., Duffaud, F., Villani, P., Pompili, J., & Botta, A. (2000, lokakuu). Tutkimus kolmen Välimeren haiden lajin raakamaksaöljyjen genotoksisesta vaikutuksesta käyttämällä mikrotumalaskutestiä ihmisen T-lymfosyyteissä. Julkaisussa Annales de Biologie Clinique (osa 58, nro 5, sivut 595-600) ( tiivistelmä ).
Buranudeen F, Richards-Rajadurai PN. Skvaleeni. Infofish Marketing Digest 1986; 1: 42-3
Bolognesi C, Parrini M, Poggieri P, Ercolini C, Pellegrino C. Karsinogeeniset ja mutageeniset epäpuhtaudet: vaikutus meren eliöihin. FAO-UNEP-IOC: n seminaarin tulokset epäpuhtauksien biologisista vaikutuksista meren eliöihin 1992; 69: 113 - 21.

Katso myös

Bibliografia

(en) N. Hachiya, "Kemiallisen genotoksisuuden arviointi lyhyellä aikavälillä tehtävien testien avulla", Akita Journal of Medicine , voi. 14, 1987, s. 269-292 ( ISSN 0386-6106 ) .