Kulttuurikeskus

Viljely väliaine on tuki, joka mahdollistaa viljelmän solut , bakteerit , hiivat ja homeet sisään , jotta niiden tutkimus. Periaatteessa solut löytävät tästä väliaineesta välttämättömät komponentit niiden lisääntymiseen suurina määrinä, nopeasti, mutta joskus myös elementtejä, jotka mahdollistavat bakteerisuvun tai -perheen etuoikeuden. Siten, riippuen viljelyn tarkoituksesta, on mahdollista sijoittaa mikro -organismit optimaalisiin olosuhteisiin tai täysin epäedullisiin olosuhteisiin.

Se koostuu emäksen ( agar-agar , vesi, mineraaleja , jne. ) Sekä värillinen indikaattori pH: n tai hapetus , jotta se voidaan muotoilla hypoteeseja suvusta.

On myös viljelyliemiä, joilla on sama tehtävä, mutta nämä väliaineet eivät sisällä agar-agaria, joten ne ovat täysin nestemäisiä.

Tässä artikkelissa kerrotaan yksityiskohtaisesti mikrobiologiaan liittyvistä viljelyalustoista .

Minimiväliaineen käsite

Vähimmäisväliaine tai määritelty väliaine on väliaine, joka käsittää kemialliset alkuaineet, jotka ovat ehdottoman välttämättömiä bakteerien kasvulle , muodossa, jota bakteerit voivat käyttää ilman erityisiä vaatimuksia.

Vähimmäisväliaineen koostumus:

hiilen ja energian lähde, yleensä glukoosi ;
kaliumin ja fosforin lähde: K 2 HPO 4 ;
lähde typen ja rikin: (NH 4 ) 2 SO 4 ;
lähde magnesium: MgCl 2 ;
kalsiumin lähde: CaCl 2 ;
raudan lähde: käytetään rautasitraattia (sitraatin tehtävänä on pitää rauta liuoksessa);
hivenaineiden lähde: Cu, Zn, Co, Ni, B, Ti suolat;
veden lähde , joka on välttämätön koko elämälle: käytetään tislattua ( steriiliä ) vettä;
pH -puskuri: sen avulla voidaan ylläpitää oikea tai jopa optimaalinen pH: esimerkiksi KH 2 PO 4 .

Jos yhtä näistä komponenteista ei ole, bakteerit eivät kasva, koska ne eivät voi syntetisoida näitä tuotteita. Sopivien kasvutekijöiden lisääminen antaa vaativille bakteereille mahdollisuuden menestyä.

Empiirinen elatusaine

Niin kutsuttu empiirinen viljelyalusta on väliaine, joka sisältää luonnollista alkuperää olevia tuotteita ja joiden tarkkaa koostumusta ei tunneta.

Sydän-aivot ympäristö

Sydän-aivotyyppisessä väliaineessa on vettä, agar-agaria, sydäntä ja aivojen hydrolysaattia tietämättä laadullisista ja määrällisistä näkökohdista. Siksi sitä käytetään vain bakteerien kasvuun. Sillä ei ole valikoivaa vaikutusta.

Kana-alkio

Ensimmäisessä virustutkimuksessa 1930-luvulta lähtien alkiottua kananmunaa käytettiin elatusaineena. Kerrottava aine siirrostetaan lapsivesi- tai allantoimikalvoille . Tässä järjestelmässä oli mahdollista tutkia virusten isorokko , herpes , influenssa , sikotauti , rabies , jne sekä solunsisäiset bakteerit, kuten rikettit . Vuonna 1950 tämä järjestelmä otettiin useimmiten syrjäyttää tutkimuslaboratorioissa mennessä soluviljelmässä . Sitä käytetään edelleen influenssarokotteen tuotantoon .

Selektiivinen elatusaine

Niin kutsutut " selektiiviset " viljelyväliaineet sallivat vain tietyntyyppisten mikro-organismien viljelyn. Tämän olemme lisätä elementtejä, jotka estävät kasvua ei-toivottujen mikro-organismien, kuten natriumkloridia suurina pitoisuuksina, natriumtiosulfaatti , kristallivioletti tai tiettyjä antibiootteja .

Lisätyt alkuaineet valitaan haetun mikro-organismin ominaisuuksien mukaan. Näitä väliaineita käytetään polybakteerinäytteen analysointiin. Tämä väliaine mahdollistaa valita vain siinä tapauksessa, positiivisen näytön: antibioottiresistenssin , prototrofiaa , jne

Esimerkkejä valikoivasta mediasta:

SS-elatusaine: se sallii vain salmonellan kasvun ( Shigella kehittyy vähemmän nopeasti: noin 48-72 tuntia ennen hyödynnettävän viljelmän saamista);
Sabouraudin väliaine: se mahdollistaa sienien kasvun ;
Kanamysiini-agar - vankomysiini, nimeltään "Kana-Vanco" tai "KV": se estää gram-positiivisten bakteerien (vankomysiinin vaikutus) ja useimpien enterobakteerien (kanamysiinin vaikutus) kasvun . Tiukat anaerobiset bakteerit kasvavat ensisijaisesti tällä alustalla.

Rikastettu kasvualusta

Rikastettu elatusaine sisältää peruskomponenttien lisäksi bakteereille välttämättömiä komponentteja, joita bakteerit eivät voi syntetisoida. Nämä ovat väliaineita, joita käytetään niin kutsuttujen " vaativien " ja auksotrofisten bakteerien hankkimiseen . Esimerkiksi: tuore veriväliaine (veressä on runsaasti erilaisia ravintoaineita, kuten rautaa, bakteerien tärkein kasvutekijä): tuoretta tai keitettyä veriagaria . Seerumi, munankeltuainen elatusaine: Baird Parker -agar tai nimeltään “BP”.

Tasauspyörästö

Niin kutsuttu " differentiaali " tai " indikaattori " -viljelyväliaine mahdollistaa kahden samassa alustassa kehittyvän mikro-organismin tyypin erottamisen. Tämän tyyppinen väliaine korostaa mikro-organismien tiettyjä biokemiallisia ominaisuuksia (pääasiassa kykyä hajottaa substraatti) kemiallisen reaktion indikaattorien läsnä ollessa: pH: n tai redoksin värilliset indikaattorit (kuten neutraali punainen , fenolipunainen , eosiini tai metyleeni) sininen ).

Eri mediasta löydämme:

CLED- ja BCP-agarit ja jotka erottavat laktoosin hajoamisen, samoin kuin E. colin epäsuora nimitys, jotka ovat hyperresistenttejä enterobakteereja;
eosiini metyleenisini agaria (EMB), erottaa käyminen laktoosin että sakkaroosi ;
MacConkey-agar (MCK), joka erottaa laktoosi käyminen. Lisäksi tämä agar on selektiivinen (katso yllä) sikäli kuin se sallii vain gramnegatiivisten basillien kasvun . Drigalski -agarilla on samat ominaisuudet;
mannitoli suola-agar (MSA), selektiivinen väliaine stafylokokit erilaistuu, mannitoli käyminen mahdollistaa suunta muun muassa Staphylococcus aureus;
Hektoën -agar, joka erottaa kolmen hiilihydraatin (laktoosi, sakkaroosi ja salisiini) käymisen sekä rikkivedyn tuotannon. Tämä agar on selektiivinen gramnegatiivisille bakteereille, se sopii erityisesti patogeenisten enterobakteerien etsimiseen ulosteesta;
SS-, XLD-, DCL- ja TCBS-agareja käytetään myös yleisesti differentiaaliväliaineina.

Kromogeeninen (tai erottava) väliaine

Tämä väline voi olla valikoiva tai ei. Sen periaate perustuu yhden tai useamman substraatin läsnäoloon, joka on kytketty kromogeeniseen molekyyliin. Kun tämä substraatti metaboloituu tietyllä bakteerientsyymillä, siihen liittyvä kromogeeni saa tietyn värin (siitä tulee kromofori), joka on suoraan luettavissa pesäkkeessä. Jos entsyymiä esiintyy vain tietyssä bakteerilajissa, tunnistaminen tapahtuu välittömästi.

Näistä ympäristöistä löydämme:

CPS E: ei-selektiivinen väliaine, joka sopii virtsatieinfektioiden diagnosointiin . Se mahdollistaa esittelyn beeta-glukuronidaasi aktiivisuuden läsnä Escherichia coli (vaaleanpunainen-Bordeaux pesäkkeet), joka vastaa 80% kystiitti Ranskassa (40% sairaalassa); beeta-glukosidaasiaktiivisuuden osoittaminen enterokokkeissa (turkoosi siniset pesäkkeet) ja tietyissä enterobakteereissa ( Klebsiella , Enterobacter , Serratia ja Citrobacter : KESC-ryhmä) (vihreänsiniset pesäkkeet). Elatusaine sallii myös suuntautumisen Proteukseen tryptofaanideaminaasiaktiivisuuden osoittamisen ansiosta (pesäkkeitä ympäröi ruskea saostusvyöhyke);
SM2: selektiivinen elatusaine gramnegatiivisille bakteereille, joka mahdollistaa salmonellan havaitsemisen ulosteesta paljastamalla salmonellalle ominaisen esteraasiaktiivisuuden;
CAN2: hiivojen selektiivinen väliaine, joka mahdollistaa Candida albicansin havaitsemisen osoittamalla heksosaminidaasiaktiivisuuden;
muut kromogeeniset väliaineet: SAID Staphylococcus aureukselle, MRSA MRSA-seulonnalle, ESBL ESBL-seulonnalle, STRB B-ryhmän streptokokkien seulonnalle .

Viljelmä Escherichia coli CPS E virtsasta.
Kulttuuri Enterococcus faecalis CPS E virtsasta.
KESC-viljelmä CPS E: llä virtsasta.
Kulttuuri Proteus CPS E virtsasta.

Ympäristön valvonta

Vuodesta 2014 lähtien ISO 1133 -standardi on säätänyt ympäristöjen suorituskykyä. Tämä tulisi tehdä säännöllisin väliajoin, kuten:

valmistajille: kaikki erät;
laboratorioille: joka vuosi esivaletut väliaineet ja joka kolmas kuukausi tai jokaisessa erävaihdos paikan päällä valmistetulle alustalle.

Aiheeseen liittyvät artikkelit

Huomautuksia ja viitteitä

Claude Chastel, virusten historia, isorokosta AIDSiin , Pariisi, Boubée,1992, 413 Sivumäärä ( ISBN 2-85004-068-1 ) , s. 78-79.
(in) Washington JA Baron's Medical Microbiology (Baron S ym. , Toim.) , Galveston, University of Texas Medical Branch,1996, 4 th ed. , kovakantinen ( ISBN 978-0-9631172-1-2 , LCCN 95050499 , lue verkossa ) , "Diagnosis Principles".